4 УДК 577.151 ПРОИСХОЖДЕНИЕ РАЗНООБРАЗИЯ СЕМЕЙСТВА CYP74 ЦИТОХРОМОВ Р450 ПО РЕЗУЛЬТАТАМ САЙТ-НАПРАВЛЕННОГО МУТАГЕНЕЗА Я.Ю. <...> Гречкин1 ( 1лаборатория оксилипинов и 2группа молекулярной биологии Казанского института биохимии и биофизики КазНЦ РАН; e-mail: yanchens@yandex.ru) Биоинформационный анализ и сайт-направленный мутагенез позволили идентифицировать детерминанты катализа ферментов CYP74 в центре I-спирали и ERR-триаде. <...> Замены K302S и T366Y в алленоксидсинтазе LeAOS3 томата привели к появлению активности гидропероксидлиазы. <...> Мутантные формы F284I, F287V, G288I, N285A и N285T гидропероксидлиазы MtHPL люцерны в отличие от фермента дикого типа, образовывавшего С12-альдокислоту, синтезировали С13-иС11-фрагменты. <...> Полученные данные подтверждают эволюционное происхождение разнообразия семейства CYP74 от единого предка, обладавшего активностью гидропероксидлиазы. <...> Ключевые слова: липоксигеназная сигнальная система, цитохромы Р450 семейства CYP74, рекомбинантные ферменты, сайт-направленный мутагенез. <...> В онтогенезе растений и в формировании у них ответа на стрессовые факторы важную роль играют ферменты липоксигеназной сигнальной системы, катализирующие образование окисленных производных жирных кислот (оксилипинов) [1—4] — липоксигеназы и цитохромы Р450 семейства СYP74, которое включает три типа ферментов: две дегидразы — алленоксидсинтаза (АОС) и дивинилэфирсинтаза (ДЭС) и одна изомераза — гидропероксидлиаза (ГПЛ). <...> Ранее были описаны три сайта в последовательностях ферментов CYP74, замены в которых приводили к изменению типа катализа: Phe295 и Ser297 у LeAOS3 томата [5] и Phe137 в АОС Arabidopsis thaliana (GenBank PDB: 3CLI) [6]. <...> Две детерминанты [5] находятся внутри центрального домена I-спирали (“I-helix central domain”, IHCD), соответствующего “кислород-связывающему” домену цитохромов Р450. <...> В отличие от “классических” представителей суперсемейства Р450, таких как монооксигеназы, ферменты семейства CYP74 не используют кислород в качестве субстрата, не зависят от систем транспорта электронов <...>