38 УДК 577.21.577.151 КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ БИОХИМИЧЕСКИХ И КИНЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ДНК-МЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ M1. <...> Дегтярев1 (1Научно-производственное объединение “СибЭнзим”, г. Новосибирск; 2Новосибирский государственный университет, г. Новосибирск; 3ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора, Кольцово, Новосибирская обл.; e-mail: tarasovamv@sibenzyme.ru) Гены ДНК-метилтрансфераз системы рестрикции-модификации BspACI из Bacillus psychrodurans AC клонировали в клетках E. coli. <...> Анализ аминокислотных последовательностей белков, кодируемых этими генами, показал, что они оба относятся к классу С5 ДНК-метилтрансфераз. <...> BspACI субклонировали в составе экспрессирующего вектора pJW2. <...> Препарат высокоочищенного рекомбинантного фермента получали с помощью хроматографии на различных носителях. <...> BspACI модифицирует первый цитозин в последовательности 5´-CCGC-3´. <...> Определены кинетические параметры реакции метилирования ДНК ферментом и показано, что каталитическая константа оказалась равной 0,095 ± 0,002 мин–1, Km ДНК фага — 0,053 ± 0,007 мкМ, Km SAM — 5,1 ± 0,3 мкМ. <...> ДНК-метилтрансферазы (метилазы, М) — сайтспецифические ферменты, катализирующие перенос метильной группы от донора, S-аденозил-L-метионина (SAM), на адениновое или цитозиновое основание в определенной нуклеотидной последовательности. <...> У прокариотических организмов, как правило, эти ферменты вместе с эндонуклеазами рестрикции (рестриктазами, R) образуют системы рестрикциимодификации (RМ-системы), основной функцией которых является защита клетки от чужродной ДНК. <...> Большинство RM-систем с несимметричными узнаваемыми последовательностями (подтип IIS) включают чаще всего две ДНК-метилтрансферазы, каждая из которых модифицирует лишь одну из цепей ДНК. <...> Ранее нами был выявлен штамм Bacillus psychrodurans AC, который продуцирует эндонуклеазу рестрикции, узнающую непалиндромную последовательность 5´-CCGC-3´ [1]. <...> В представленной работе описано клонирование, выделение, биохимические и субстратные <...>